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成功案例
發(fā)布日期:2024/10/24 9:50:00

實驗原理

通過不同的干預(yù)手段如脂多糖誘導(dǎo)、吸入性損傷、體外循環(huán)心臟手術(shù)等來模擬急性肺損傷的情況,使動物處于全身炎癥反應(yīng)狀態(tài),刺激機體釋放炎性細胞因子,從而引起級聯(lián)反應(yīng),使肺泡上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞受損,引起肺部病變。其中脂多糖模擬法應(yīng)用更為廣泛,目前比較常見的脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷模型制備方法有三種,腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),氣管滴注LPS和盲腸結(jié)扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)誘導(dǎo),本文采用腹腔注射脂多糖法制備。

實驗準備

實驗動物選擇:品類:SD大鼠   性別:雌雄各半   體重:220~300g

實驗試劑及儀器設(shè)備:脂多糖、肺部液體定量霧化器、酶標儀、電子天平等

 

操作步驟

制備周期:1周,根據(jù)實驗需求調(diào)整

實驗分組:隨機分組法,分為正常組、實驗組、恢復(fù)組

制備方法:適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,正常組給予生理鹽水腹腔注射,其余各組腹腔注射聯(lián)合氣道內(nèi)霧化脂多糖誘導(dǎo)ALI 模型,造模后約 2 -3h 大鼠逐漸出現(xiàn)高熱,呼吸急促等表現(xiàn),造模成功。

后續(xù)實驗

1.造模后,正常組、實驗組采用生理鹽水灌胃;恢復(fù)組給予地塞米松溶液灌胃,分別于 LPS 注射后 0、8、16 h 給藥,共 3 次。

2.LPS 造模 24 h 后,大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉,處死后收集肺組織、血清等樣本。肺組織以 4% 多聚甲醛固定,用于組織學(xué)檢測。

檢測研究評價

HE檢測:可在低倍鏡下觀察到肺組織的炎癥細胞浸潤、水腫以及損傷,評估肺部損傷分布情況。

免疫組化檢測:檢測肺組織中炎癥因子表達情況以及關(guān)注的重點信號通路基因表達情況;

WB檢測:肺組織中關(guān)注的重點信號通路基因表達情況;

ELISA檢測:血清中炎癥因子的表達情況。

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